INFLUENCE OF USING HYDROCHLORIC ACID FOR MEASURING THE CONCENTRATION OF TOTAL CARNITINE IN HUMAN PLASMA BY TANDEM MASS SPECTROMETRY / INFLUENCIA DEL USO DE ÁCIDO HIDROCLÓRICO PARA MEDIR LA CONCENTRACIÓN DE LA CARNÍTINA TOTAL EN EL PLASMA HUMANO POR ESPECTROMETRÍA DE MASAS EN TANDEM

The present study establishes whether the pH of samples is crucial for measuring total carnitine in human plasma by tandem mass spectrometry and if it is necessary to neutralize the samples after alkaline hydrolysis of acylcarnitines. Free and total carnitine of ten plasma samples were measured by a radioenzymatic assay as a reference method, and forward there were analyzed by tandem mass spectrometry divided into two groups: treated with hydrochloric acid and without hydrochloric acid measuring each sample five times for both variables. Free and total carnitine concentrations were similar for the radioenzymatic essay and tandem mass spectrometry. There was no significant difference between the two analyzed variables (treated with hydrochloric acid and without hydrochloric acid). It could be concluded that the pH of samples is no crucial for measuring total carnitine in plasma by tandem mass spectrometry, and it is not necessary to neutralize the samples after alkaline hydrolysis of acylcarnitines, then the shorter method, without adding hydrochloric acid can be used for total carnitine measurement in plasma by tandem mass spectrometry.

El presente estudio establece, si el pH al cual se procesan las muestras, condiciona la determinación de la carnitina total en plasma, mediante el uso de espectrometría de masas en tándem; así mismo analiza, si es necesario neutralizar las muestras luego de la hidrólisis alcalina de las acilcarnitinas. Carnitina libre y total de 10 muestras de plasma fueron medidas mediante el ensayo radioenzimático, como método de referencia. Posteriormente fueron medidas cinco veces cada muestra, mediante espectrometría de masas en tándem utilizando ácido hidroclorhídrico y sin usar ácido hidroclorhídrico. Las concentraciones de carnitina libre y total, fueron similares utilizando ensayo radioenzimático y espectrometría de masas en tándem. No se encontró diferencias significativas entre las dos variables analizadas (con ácido hidroclorhídrico, o sin ácido hidroclórhídrico). Puede concluirse que el pH de las muestras no es crucial para medir carnitina total en plasma por espectrometría de masas en tandem y no es necesario neutralizar las muestras luego de la hidrólisis alcalina de las acilcarnitinas. El método más corto puede ser utilizado para tal fin.

Búsqueda de biomarcadores a partir de péptidos expresados en biopsias de cáncer de mama / Search for biomarkers from peptides expressed in breast cancer biopsies / Busca de biomarcadores a partir de peptídeos expressos em biópsias câncer de mama

El cáncer de mama (CM) es una de las principales causas de muerte en México. Se ha observado un incremento en la incidencia de éste en mujeres de 15-29 años. A fin de comprender las causas en el desarrollo del CM, se pretendió buscar la asociación entre los genes/enfermedad empleando técnicas de Biología Molecular. Se analizaron, por genómica funcional, 50 biopsias frescas de pacientes con CM (BFCM), 50 biopsias embebidas en parafina de CM (BEPCM) y 10 biopsias frescas de pacientes con sospecha de CM (BFSC), obtenidas de mujeres que residen en Coahuila, México. Las muestras proteicas se cuantificaron y se resolvieron en geles de poliacrilamida dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) y en dos dimensiones (2-DE). El perfil proteico de las BFCM, BEPCM versus BFSC mostró diferencias entre las bandas peptídicas observadas en los geles. Aquellos péptidos que se diferenciaron por su expresión fueron analizados por cromatografía líquida acoplada a masas en tándem (LC/ MS/MS). Las huellas peptídicas obtenidas, a su vez, se analizaron por medio del banco de genes (PubMed). Se encontraron, en las muestras de cáncer, proteínas asociadas a migración celular, supresión de tumores, estrés oxidativo y choque térmico. Por último, estos hallazgos se confirmaron empleando inmuno-electro transferencia o Western blot (WB) con anticuerpos contra vimentina.

Breast cancer (BC) is one of the leading causes of death in Mexico. Moreover, BC is the main cause of death in women between 15-29 years old in northern Mexico. Proteomic techniques have been used in order to achieve a better understanding of the genes involved in the development of BC. The proteins in BC extracted from 50 fresh breast cancer tissues (FBCT), 50 paraffin embedded breast cancer tissues (PEBCT) and 10 biopsies from women suspected of cancer (SC), residing in Coahuila, Mexico were analyzed in this paper. The quantity of protein extracted was similar in both samples FBCT and PEBCT. However, protein quality was lower in PEBCT than FBCT. Subsequently, these proteins were resolved in SDS-PAGE and 2DE. Differences were noticed in protein profile and all those suspect proteins were analyzed by LC/MS/MS. Amino acidic fingerprint allowed for the identification of peptides associated with a) cell migration, b) tumor suppression, c) oxidative stress or heat shock.

O câncer da mama (CM) é uma das principais causas de morte no México. Observou-se um aumento na incidência desse câncer em mulheres entre os 15-29 anos de idade. Para compreender as causas do desenvolvimento de CM, visou-se encontrar a associação entre os genes/doença utilizando técnicas de Biologia molecular. Analisaram-se por genômica funcional, 50 biópsias frescas de pacientes com CM (BFCM), 50 biópsias embebidas em parafina (BEPCM) e 10 biópsias frescas de pacientes com suspeita de CM (BFSC), obtidas de mulheres residentes em Coahuila, México. As amostras de proteínas foram quantificadas e separadas em géis de poliacrilamida dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) e em duas dimensões (2-DE). O perfil proteico das BFCM, BEPCM comparado com BFSC mostrou diferenças entre as bandas peptídicas observadas nos géis. Esses peptídeos que diferem em sua expressão foram analisados por cromatografia líquida acoplada a massas em tandem (LC/MS/MS). As pegadas peptídicas obtidas, por sua vez, foram analisadas utilizando o banco de genes (PubMed). Verificaram-se nas amostras de câncer, proteínas associadas à migração celular, supressão de tumores, estresse oxidativo e choque térmico. Finalmente, estes achados foram confirmados utilizando a imuno-eletro transferência ou Western Blot (WB) com anticorpos contra vimentina.

Reference values of amino acids, acylcarnitines and succinylacetone by tandem mass spectrometry for use in newborn screening in southwest Colombia / Valores de referencia de aminoácidos, acilcarnitinas y succinilacetona por espectrometría de masas en tándem para su uso en el tamizaje neonatal en el suroccidente de Colombia

Abstract Introduction: Inborn errors of metabolism (IEM) represent an important public health problem due to current diagnosis and treatment limitations, poor life quality of affected patients, and consequent untimely child death. In contrast to classical methods, tandem mass spectrometry (MS/MS) has allowed simultaneous evaluation of multiple metabolites associated with IEM offering higher sensitivity, low false positive rates and high throughput. Aims: Determine concentration levels for amino acids and acylcarnitines in blood of newborns from Colombia, to establish reference values for further use in diagnosis of IEM. Methods: Implementation of a method to determine amino acids, acylcarnitines and succinylacetone in newborn dried blood spots using MS/MS, and its application in a cross-sectional study conducted in 891 healthy neonates from Cali and Quibdo cities is described. Results: fifty-seven analytes that allow the diagnosis of more than 40 different pathologies were tested. The method showed to be linear, precise and accurate. Healthy neonates 1-18 days of age were included, 523 from Cali and 368 from Quibdo; 52% male and 48% female. Age-related differences on the concentration levels of amino acids and acylcarnitines were observed whereas no significant differences by gender were found. Conclusion: The study has contributed to reveal the usual concentration levels of amino acids, acylcarnitines and succinylacetone that could be used as reference for the establishment of a newborn metabolic screening program in Colombia.

Resumen Introducción: Los Errores Innatos del metabolismo (EIM) representan un importante problema de salud pública debido a limitaciones en el tratamiento y diagnóstico oportuno, la pobre calidad de vida de los pacientes afectados, así como la muerte infantil prematura. Comparada con los métodos clásicos, la espectrometría de masas en tándem (MS/MS) ha permitido la evaluación simultánea de múltiples metabolitos asociados con EIM, con una alta sensibilidad, baja proporción de falsos positivos y alto rendimiento. Objetivos: Determinar los niveles de concentración de aminoácidos y acilcarnitinas en sangre de recién nacidos de Colombia, para establecer los valores normales para usarlos como referencia en el diagnóstico de EIM. Métodos: Aquí, se describe la implementación de un método para determinar aminoácidos, acilcarnitinas y succinilacetona en gotas de sangre seca de recién nacidos usando MS/MS, y su aplicación en un estudio de corte transversal realizado en 891 neonatos sanos de las ciudades de Cali y Quibdó. Resultados: Se evaluaron 57 analitos que permiten el diagnóstico de más de 40 patologías diferentes. El método mostró ser lineal, preciso y exacto. Se incluyeron neonatos sanos de 1-18 días de edad, 523 de Cali y 368 de Quibdó, 52% hombres y 48% mujeres. Se observaron diferencias en los niveles de concentración de aminoácidos y acilcarnitinas relacionadas con la edad, mientras que no se encontraron diferencias significativas por sexo. Conclusión: El estudio ha contribuido a revelar los niveles usuales de concentración de aminoácidos, acilcarnitinas y succinilacetona que pueden ser usados como referencia para el establecimiento del programa de tamizaje neonatal metabólico en Colombia.

Confirmación de dexametasona y diclofenaco por LC-MS-MS como adulterantes en un producto herbolario / Dexamethasone and diclofenac by LC-MS-MS as herbal product adulterants

Objetivo. Confirmar la presencia de dexametasona y diclofenaco como adulterantes de un producto comercializado como de origen natural. Material y métodos. Para la identificación y confirmación de la presencia de los fármacos se utilizó un método de análisis instrumental por cromatografía de líquidos de alta presión acoplado a espectrometría de masas en tándem. Resultados. En el análisis de 11 frascos de Reumofan Plus obtenidos de pacientes y médicos de la localidad se confirmó la presencia de dexametasona y diclofenaco. La metodología utilizada permitió separar los esteroisómeros dexametasona y betametasona, las abundancias relativas de iones productos 237.2 y 279.2 m/z permiten diferenciar espectralmente un compuesto de otro. Conclusiones. Se confirmó la presencia de dexametasona y diclofenaco en muestras de un producto comercializado como "100% natural" obtenidas de diferentes pacientes o médicos en el periodo enero a diciembre de 2011.

Objective. To confirm the presence of dexamethasone and diclofenac as adulterants of an herbal product. Materials and methods. For identificaction and confirmation of drugs a method of instrumental analysis by liquid chromatography coupled with high pressure tandem mass spectrometry was used. Results. The presence of dexamethasone and diclofenac was confirmed in samples of 11 bottles of Reumofan Plus obtained from patients and/or physicians. The methodology used, allowed separation of stereoisomers dexamethasone and betamethasone, the relative abundances of product ions 237.2 and 279.2 m / z spectrally differentiate the compounds. Conclusions. The presence of dexamethasone and diclofenac was confirmed in samples of a product marketed as "100% natural" obtained from patients and / or physicians in a period from January to December, 2011.

Evaluation of fvve different scan functions forthe analysis of carnitine in huuman plasma by tandem mass spectrometry / Evaluaciónde cinnco funciones de escaneadopara el análisis de carnitina een plasma humano por espectrometria de masas en tandem

Abstract: the determination of carnitine levels through electrospray tandem mass spectrometry using human plasma for the detection of alteration in mitochondrial oxidation of fatty acids and organic acidemias, has been described; however improving precision in the method used for such end is desirable. Materials y methods: carnitine in plasma was measured by tandem mass spectrometry using five different methods: derivatized (4 methods) and underivatized (1 method). Results: no significant difference was observed between the five functions evaluated. Conclusion: any of the functions evaluated can be used to determine carnitine in plasma.

Introducción: la determinación de los niveles de carnitina mediante el uso de espectrometría de masas en tándem, utilizando plasma humano, para la detección de alteraciones en la oxidación mitocondrial de ácidos grasos y acidurias orgánicas, ha sido descrita, sin embargo es deseable mejorar la precisión de los métodos usados para tal fin. Materiales y métodos: la carnitina en plasma fue analizada mediante espectrometría de masas en tándem mediante 5 diferentes métodos: derivatizando (4 métodos) y sin derivatizar (1 método). Resultados: no se observó diferencia significativa entre las cinco funciones evaluadas. Conclusión: cualquiera de las funciones aquí evaluadas, puede ser utilizada para determinar carnitina en plasma.

Aplicación de la espectrometría de masas en tandem en el tamiz neonatal de los errores innatos del metabolismo / Use of tandem mass spectrometry for the newborn screening of inborn errors of metabolism / Aplicação da espectrometria de massas em tandem no screening tamiz neonatal dos erros inatos do metabolismo

La aplicación de la espectrometría de masas en tandem en el diagnóstico de los errores innatos del metabolismo ofrece la posibilidad de ampliar el número de enfermedades que son tamizadas durante el periodo neonatal. Esta tecnología permite detectar, con gran sensibilidad, especificidad y rapidez, más de 30 enfermedades metabólicas en un mismo ensayo a partir de un único disco de sangre seca sobre papel de filtro. Para esto se realiza el análisis combinado del perfil de aminoácidos y acilcarnitinas sin requerir, generalmente, de sistemas de cromatografía adicionales. El procesamiento analítico que actualmente se utiliza en los diferentes laboratorios de tamiz es relativamente homogéneo.

The use of tandem mass spectrometry in the diagnosis of inborn errors of metabolism has the potential to expand newborn screening programmes to include many different diseases. This technique can quickly detect, with great specificity and sensibility, more than 30 diseases using the same punch of dried blood in filter paper through the combined analysis of acylcarnitines and amino acid mass spectra profile. The detection of a particular disease this way could be made without the need of a chromatographic system. The analytical analyses in current use by different screening laboratories are very similar.

A aplicação da espectrometria de massas em tandem no diagnóstico dos erros inatos do metabolismo oferece a possibilidade de ampliar os programas de screening neonatal para incluir maior número de doenças. Esta tecnologia permite detectar, com grande sensibilidade, especificidade e rapidez, mais de 30 doenças metabólicas em um mesmo ensaio a partir de um único disco de sangue seco sobre papel de filtro. Para isso é realizada a análise combinada do perfil de aminoácidos e acilcarnitinas sem precisar, geralmente, de sistemas de cromatografia adicionais. O processamento analítico que atualmente è utilizado nos diferentes laboratórios de screening é relativamente homogêneo.

Effect of anticaagulant type during the blood smple collection process on the determination of the acylcarnitine profile in blood and plasma / Efcto del tipo ddeanticoagulante utilizado en la toma de muestrass, sobre la determinación del perfil de acilcarnitinas en sangre y plamma

Background: the collection process for blood sampling is a very important factor that can influence the final results of some laboratory tests. The acylcarnitine determinations in blood are usually used for diagnosis and follow up of patients suffering certain inherited metabolic illnesses. Objective: this study analyzed the possible influence of the type of anticoagulant used in blood sampling on the acylcarnitine profile. Methodology: blood and plasma samples were collected using anticoagulants such as: lithium heparin, potassium EDTA, sodium fluoride-potassium oxalate, and sodium citrate. Samples were also collected without the use of anticoagulants. Acylcarnitine levels were assessed for each sample via tandem mass spectrometry. Results: no significant differences were found among the anticoagulant used. Conclusion: the type of anticoagulant has no effect on the acylcarnitine determination on blood or plasma. For this type of analysis any of the above mentioned anticoagulants can be used. Abbreviations: ESI-MS/MS, electrospray injection tandem mass spectrometry; IEM, innate errors of metabolism.

Antecedentes: la toma de muestras de sangre es un factor importante que puede influir los resultados finales de algunas pruebas de laboratorio. Las determinaciones de acilcarnitinas en sangre son utilizadas corrientemente para el diagnóstico y seguimiento de pacientes que sufren enfermedades metabólicas hereditarias. Objetivo: el presente estudio analizó la posible influencia del tipo de anticoagulante utilizado en la toma de la muestra de sangre, sobre el perfil de acilcarnitinas obtenido. Metodología: muestras de sangre y plasma fueron obtenidas utilizando heparina, potasio-EDTA, fluoruro de sodio-oxalato de potasio, y citrato de sodio y sin anticoagulante. Resultados: no fue encontrada diferencia estadísticamente significativa entre los anticoagulantes utilizados. Conclusión: el tipo de anticoagulante no tiene efecto sobre la determinación de acilcarnitinas en sangre o plasma. Para este tipo de análisis, puede ser utilizado cualquier anticoagulante de los antes mencionados. Abreviaturas: IEE-MS/MS, inyección de electrospray espectrometría de masas en tándem; EIM, errores innatos del metabolismo.

Effect of addin the internal standard to bloodsamples, prior to the preparatiion of blood spots for acylcarnitine aaalysis / Efeco de la adicción del estandar inerno a muestras de sangre antess de la preparación de manchas de sangre para el analisis de acylcarnitinas

Background: some general factors can influence when determining acylcarnitines through tandem mass spectrometry. Objective: to study the effect of adding the internal standard to blood samples before the preparation of filter paper cards compared with the addition of internal standard after having the filter paper cards prepared for determining acylcarnitines in blood for tandem mass spectrometry. Methodology: two groups of blood samples were prepared: group one without adding internal standard before the preparation of filter paper cards, and group two adding internal standard prior to the preparation of filter paper cards. Subsequently the acylcarnitines profile was measured using tandem mass spectrometry. Results: the recovery of acylcarnitines during extraction for the samples which were not added the internal standard before the preparation of the filter paper cards was 48% while for the samples that were added the internal standard the recovery percentage was 96% which shows a significant difference between the two groups. Conclusion: the ideal extraction process showing the highest acylcarnitines recovery level happens by adding the internal standard to the sample prior to the preparation of filter paper cards. However, for diagnostic purposes, filter paper cards containing samples without internal standard are normally received for the acylcarnitines analysis and, therefore, the method used to add the internal standard after preparing the samples on filter paper without internal standard is appropriate for determining acylcarnitines in blood. Abbreviations: ESI-MS/MS, Electrospray and tandem mass spectrometry.

Antecedentes: algunos factores generales pueden influir en la determinación de acilcarnitinas por espectrometría de masas en tándem. Objetivo: estudiar el efecto de agregar el estándar interno a las muestras de sangre antes de la preparación de las tarjetas en papel de filtro, comparado con la adición del estándar interno luego de preparar las tarjetas en papel de filtro sobre la determinación de acilcarnitinas en sangre por espectrometría de masas en tándem. Metodología: dos grupos de muestras de sangre fueron preparados: al grupo uno no le fue adicionado el estándar interno antes de la preparación de las tarjetas en papel de filtro, mientras que al grupo dos sí, y posteriormente se midió el perfil de acilcarnitinas por espectrometría de masas en tándem. Resultados: la recuperación de acilcarnitinas durante la extracción para las muestras a las cuales no se les agregó el estándar interno antes de la preparación de las tarjetas en papel de filtro fue del 48%, mientras que con las muestras a las cuales se les adicionó el estándar interno se obtuvo un porcentaje de recuperación del 96%, observándose una diferencia significativa entre los dos grupos. Conclusión: el proceso de extracción ideal que presenta el máximo nivel de recuperación de acilcarnitinas se da agregando el estándar interno a las muestras de sangre antes de preparar las tarjetas en papel de filtro. Sin embargo, con fines diagnósticos, las tarjetas de papel de filtro que contienen muestras de sangre sin estándar interno son recibidas para el análisis de acilcarnitinas y, por lo tanto, el método mediante el cual se agrega el estándar interno luego de preparar las muestras en papel de filtro sin estándar interno es adecuado para la determinación de acilcarnitinas en sangre. Abbreviations: ESI-MS/MS, Electrospray tandem mass spectrometry.

Hidrólisis de acilcarnitinas durante el análisis en sangre y plasma por espectrometría de masas en tandem / Hydrolysis of acylcarnitines during measurement in blood and plasma by tandem mass spectrometry

La determinación de acilcarnitinas en sangre es una herramienta importante para el diagnóstico de algunas enfermedades hereditarias, así como deficiencias metabólicas secundarias. Bajo las condiciones acídicas y la alta temperatura utilizadas durante el proceso de derivatización, es posible que pueda ocurrir algún grado de hidrólisis de acilcarnitinas, lo cual puede potencialmente interferir con las determinaciones de la carnitina libre. El objetivo del presente estudio fue investigar la hidrólisis de las acilcarnitinas (de cadena corta, media y larga) durante el proceso de derivatización y analizar su efecto sobre la determinación de carnitina libre. El porcentaje de hidrólisis fue de 27% para acilcarnitinas de cadena corta, 17% para acilcarnitinas de cadena media y 5% para acilcarnitinas de cadena larga. Estos resultados pueden ocasionar un incremento en los niveles de carnitina libre de las muestras analizadas.

The measurement of acylcarnitines in blood is an important tool for diagnosis of some inherited metabolic diseases and secondary metabolic deficiencies. Under the acidic conditions and the high temperature used for the derivatisation process, it is feasible that some degree of hydrolysis of acylcarnitines to free carnitine may occur and therefore potentially interfere with free carnitine measurements. The objective of the present study was to investigate the hydrolysis of acylcarnitines (short-chain-, medium-chain, and long chain acylcarnitines) during derivatisation process and to analyse its effect on free carnitine measurement. The average percentage of hydrolysis was 27% for short-chain acylcarnitines, 17% for medium-chain acylcarnitines, and 5% for long-chain acylcarnitines. These results can increase the free carnitine levels in the analysed samples.

Effect of acetoiitrile concentration on acylcaritines measurement by tandem maass spectrometry / Efecto de las concentraciones de acetonitrilo en la determinaciónde acilcarnitinnas mediante espectrometría de masas en tándem

Background: the several steps for acylcarnitine analysis by tandem mass spectrometry such as extraction, derivatisation, injection and others, can be influenced by some technical factors improving or impairing the levels of detection. Objective: the present study evaluated the effect of different concentrations of the acetonitrile used during blood acylcarnitines measurement on the sensitivity obtained during the analysis. Methodology: prior to acylcarnitine analysis by tandem mass spectrometry, samples were re-dissolved in different acetonitrile in water dilutions [50, 60, 70, 80, 90, and 100% (v/v)] and each single blood specimen was processed five times for each dilution. Results: it was observed that by increasing the concentration of acetonitrile the intensity of acylcarnitine peaks significantly increased. However at the highest concentrations of acetonitrile, this reacted with the polystyrene material of the microtitre plates, and resulted in peaks appearing in acylcarnitine profiles, specifically at m/z 302. Conclusion: a mixture of 70% v/v acetonitrile/water is recommended to use as optimum solvent to dissolve the extracts prior to blood acylcarnitine analysis by tandem mass spectrometry.

Antecedentes: las diferentes etapas que conforman el análisis de acilcarnitinas por espectrometría de masas en tándem, tales como extracción, derivatización, inyección y otras, pueden ser influenciadas por algunos factores técnicos incrementando o disminuyendo los niveles de detección. Objetivo: el presente estudio evaluó el efecto de la concentración del acetonitrilo utilizado durante la determinación de acilcarnitinas en sangre, sobre la sensibilidad obtenida durante el análisis. Metodología: antes del análisis de acilcarnitinas por espectrometría de masas en tándem, las muestras fueron disueltas en diferentes disoluciones de acetonitrilo en agua [50, 60, 70, 80, 90, and 100% (v/v)] y cada espécimen de sangre fue procesado 5 veces para cada dilución. Resultados: se observó que a medida que se incrementan los niveles de acetonitrilo, la intensidad de los picos de acilcarnitinas se incrementan significativamente. Sin embargo, a las concentraciones más altas de acetonitrilo, éste reacciona con el poliestireno de las bandejas, apareciendo picos en el perfil de acilcarnitinas, específicamente a m/z 302. Conclusión: una mezcla al 70% v/v acetonitrilo/agua, se recomienda para usar como solvente óptimo, para la disolución de los extractos antes del análisis de acilcarnitinas en sangre mediante espectrometría de masas en tándem.

Tamizaje neonatal por espectrometría de masas en tándem: actualización / Neonatal screening by tandem mass spectrometry: an update

La espectrometría de masas en tándem (MS/MS) ha posibilitado la expansión de los programas de tamizaje neonatal en diferentes países. Esta tecnología permite el diagnóstico múltiple y rápido de diversos errores innatos del metabolismo. Sin embargo, su aplicación en distintos programas en el ámbito mundial es actualmente muy heterogénea. Existen diferentes criterios para determinar si se incluye una enfermedad específica en esos programas, en algunos casos con un enfoque más restrictivo que en otros, de acuerdo con los principios tradicionales de tamizaje enunciados por Wilson y Jungner, los que habrán de ser reevaluados a la luz de esta nueva tecnología. En este trabajo se presenta una actualización sobre el uso de la MS/MS en diferentes regiones del mundo en relación con las enfermedades tamizadas y con los criterios de inclusión de nuevos problemas de salud en los programas de tamizaje neonatal.

Tandem mass spectrometry (MS/MS) has made it possible to expand neonatal screening programs in different countries. This technology permits multiple and rapid diagnosis of diverse inborn errors of metabolism. However, its use in different programs around the world currently varies widely. There are different criteria for determining whether to include a specific disease in such programs, with some cases employing a more restrictive approach than others, based on the traditional screening principles enunciated by Wilson and Jungner, which will have to be reevaluated in light of this new technology. This article presents an update on the use of MS/MS in different regions of the world in terms of the diseases screened for, and the criteria for including new health problems in neonatal screening programs.

Identificación diferenciación de monosacárido y disacáridos diasteroméricos no derivatizados por esi-it-ms/ms / Identification nnd differentiation of underivatzed diasteromeric mono-and disaaccharides by esi-it-ms/ms

Los azúcares son importantes moléculas que desempeñan funciones trascendentales de señalización celular en los organismos superiores. Su complejidad estructural, representada por sus isómeros, anómeros y diasterómeros, amerita la implementación de metodologías modernas, rápidas y sensibles para su identificación y diferenciación. La espectrometría de masas y su analizador de trampa de iones brinda nuevas alternativas de análisis que favorecen el control de las energías de fragmentación de los analitos. A pesar de que la diferenciación de estereoisómeros no ha sido el campo de aplicación principal de la espectrometría de masas, se ha implementado una metodología para diferenciar los monosácaridos β-D-galactosa y β-D-glucosa y los disacαridos β-D-galactopiranosil-(1→4)-β-D-glucopiranσsido (lactosa), α-D-glucopiranosil-(1→4)-β-D-glucopiranσsido (maltosa) y β-D-fructofuranosil-(2↔1)-α-D-glucopiranσsido (sacarosa) a travιs de sus aductos con amonio y litio por ESI-IT-MS/MS en infusión directa. Se emplean diferentes energías de fragmentación para asegurar la existencia de iones marcadores de la estereoquímica de los analitos. Se evidencia que controlar las energías de colisiones en el análisis estructural de moléculas provee una poderosa y moderna herramienta analítica para los laboratorios de análisis.

Sugars are important molecules with remarkable cell signals pathway functions in higher organisms. The structural complexity of sugar represented by its isomeric, anomeric and diasteromeric configurations deserve the implementation of modern, rapid and sensitive methodologies for its identification and differentiation. Mass spectrometry and its analyzer of ion trap provide new alternative techniques that encourage the control of the fragmentation energies supplied to molecules. Since stereoisomer differentiation is consider outside the mass spectrometry domain, a methodology has been applied in order to differentiate β-D-galactose, β-D-glucose and the disaccharides β-D-galactopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside (lactose), α-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside (maltose) y β-D-fructofuranosyl-(2↔1)-α-D-glucopyranoside (sacarose) trough its ammonium and lithium adducts by infusion on ESI-IT-MS/MS mass spectrometer. Different fragmentation energies have been used to ensure the ion marker occurrence in the analyte stereochemistry. It is evident that the collision energies control in structural analysis of molecules provides a powerful and modern analytical tool to be applied in control laboratories.

Tráfico de acyl- CoA de membrana y niveles remanentes en glóbulos rojos, plasma y suero, analizados por espectrometría de masas en tandemso de la espectrometría de masas en tándem / Membrane ACYL-CoA traffic and remaning levels in red blood cells, plasma and serum analysed

Existe un cuestionamiento permanente acerca del fluido ideal para el análisis de carnitina y acilcarnitina por medio de la espectrometría de masas en tándem. El presente estudio evalúa el porcentaje de carnitina y acilcarnitinas en glóbulos rojos y la relación con el contenido de carnitina y acilcarnitina en la sangre, plasma y suero. Se centrifugaron muestras de sangre humana, se extrajeron plasma y suero, y se lavaron los glóbulos rojos con diferentes soluciones isotónicas. Se resuspendió el pellet en PBS para la preparación de tarjetas y análisis por espectrometría de masas en tandem. Se encontró que la carnitina y las acilcarnitinas de cadenas corta, media y larga, permanecen en los glóbulos rojos en porcentajes promedio de 43,4; 48;49; y 70% respectivamente. Se encontró una diferencia significativa entre los niveles de carnitina y acilcarnitina en la sangre comparado con sus niveles en plasma o suero (p<0,05). Dada la asociación de la carnitina y las acilcarnitinas con los glóbulos rojos, parece ser que ni la plasma ni el suero son el material ideal para el análisis de carnitina y acilcarnitinas.

There has been a permanent question about the ideal fluid for carnitine and acylcarnitine analysis by tandem mass spectrometry. The present study evaluates the percentage of carnitine and acylcarnitines in red blood cells and the relationship with the carnitine and acylcarnitines content in whole blood, plasma, and serum. Human blood samples were centrifuged, plasma or serum extracted, and blood cells were washed with different isotonic solutions. The final pellet was resuspended in PBS for card preparation and tandem mass spectrometry analysis. It was found that carnitine, short-chain, medium-chain and longchain acylcarnitines remain in red blood cells at average percentages of 43.4; 48; 49; and 70% respectively. A significant difference was found between carnitine and acylcarnitine levels in whole blood compare to its levels in plasma or serum (p<0.05). As carnitine and acylcarnitines remained associated with the blood cells, it seems therefore that plasma (or serum) is not the ideal material for the analysis of carnitine and acylcarnitines.

El tamizaje metabólico en el diagnóstico de los errores innatos del metabolismo / The metabolic screening for the diagnosis of metabolic inborn errors

Los errores innatos del metabolismo pueden debutar clínicamente desde el nacimiento hasta la edad adulta. Sin embargo, muchas alteraciones pueden ser manejadas si se realiza diagnóstico precoz, evitando lesiones severas en algunos sistemas del organismo. La presente revisión analiza la literatura científica disponible con relación al tamizaje de estas enfermedades mediante espectrometría de masas en tándem.

Clinical manifestations of inherited inborn errors can manifest themselves from birth to adulthood. However, many disorders can be treated if an early diagnosis is performed, in order to avoid severe lesions in some organic systems. The present review analyzes the scientific literature related to the screening of these diseases by means of tandem mass spectrometry.

Perfil de acilcarnitinas en una población adulta colombiana como herramienta diagnóstica de las deficiencias de la oxidación mitocondrial de los ácidos grasos / Acilcarnitines profile in adults as a tool for diagnosis of mitochondrial fatty acid oxidation deficiencies

Fundamento y objetivo: la determinación de acilcarnitinas en sangre es una prueba útil en el diagnóstico de los errores hereditarios de la β-oxidación mitocondrial de los ácidos grasos, sin embargo, existen pocos datos en la literatura relacionados con valores de referencia para acilcarnitinas y si esos valores dependen de la edad o el sexo. Los objetivos del presente trabajo son llamar la atención acerca de los errores innatos de la β-oxidación mitocondrial de los ácidos grasos y establecer valores de referencia para acilcarnitinas en adultos. Pacientes y métodos: fueron tomadas muestras de sangre de 316 adultos de los cuales 158 hombres y 158 mujeres, con un rango de edad comprendido entre 18 y 58 años; las muestras fueron analizadas por espectrometría de masas en tándem. Resultados y conclusiones: no fueron encontradas diferencias significativas relacionadas con el sexo. El intervalo y los valores promedio ± la desviación estándar son presentados. Es importante resaltar la ausencia de hidroxiacilcarnitinas y glutarilcarnitina cuando se procesan muestras normales. Se revisó la bibliografía relacionada con los principales hallazgos clínicos y de laboratorio en las deficiencias de la β-oxidación mitocondrial de los ácidos grasos...

Introduction: the acylcarnitines measurement in blood is a useful test for the diagnosis of inherited errors of fatty acid mitochondrial β-oxidation, however there is little data in the literature regarding the reference ranges of various acylcarnitines and whether these reference ranges are age or sex dependent. The aims of this work are to draw the attention to inherited disorders of mitochondrial fatty acid b-oxidation and to establish reference values for acylcarnitines in adults using tandem mass spectrometry. Patients and methods: 316 blood samples normal adults, 158 male, 158 female, with a range of age between 18 and 58 years, were obtained and analysed using tandem mass spectrometry. No significant differences were found related to sex; the interval and average values ± standard deviation are presented. It is important to remark the absence of hydroxyacylcarnitines and glutaryl carnitine processing normal samples. Was reviewed the literature related to the main clinical and laboratory findings in mitochondrial fatty acid b-oxidation deficiencies...

Defectos de la oxidación de ácidos grasos como causa de hipoglucemia no cetósica en el niño / Fat acid oxidation defects produce nonketotic hypoglycemia in childhood

Fatty acid oxidation defects (FAOD) cause a group of inherited metabolic diseases that impair mitochondrial energy production from lipids. The clinical presentation includes hypoketotic hypoglycaemia, acute liver failure, myocardiopathy and myopathy after a prolonged fasting. Inheritance is autosomal recessive and the global incidence is 1:10.000 newborn, varying between 1:9.000 and 1:60.000 newborns for medium-chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency (MCAD), the most frequent FAOD. Therapy is dietary and pharmacological. As soon as the diagnosis is confirmed enough glucose to prevent lipolysis must be introduced, especially in the neonatal period and during metabolic derangements caused by infections. Nutritional treatment consists in avoiding any period of fasting by giving carbohydrate supplement when appetite is diminished, which is easy and inexpensive to do. The prognosis with presymptomatic diagnosis is excellent when done with a blood sample obtained in the neonatal period and analysed by tandem mass spectrometry, and when treatment is started immediately.

Los defectos de oxidación de los ácidos grasos corresponden a un grupo de alteraciones metabólicas hereditarias que afectan la producción intramitocondrial de energía a partir de los lípidos. Clínicamente se expresan con hipoglucemia no cetósica, insuficiencia hepática aguda, miocardiopatía o miopatía desencadenada por un ayuno prolongado. La herencia es autosómica recesiva y su frecuencia global se estima en 1:10.000 recién nacidos (RN), y entre 1 por 9 000 a 1 por 60 000 RN para el déficit de acil-CoA deshidrogenasa de cadena media (abreviado MCAD) defecto más frecuente en este grupo de patologías. Las medidas terapéuticas pueden ser dietéticas y farmacológicas. Una vez establecido el diagnóstico diferencial del tipo de defecto, es importante proporcionar suficiente cantidad de glucosa para prevenir la lipólisis del tejido adiposo, siendo fundamental en el período neonatal y las en descompensaciones metabólicas por infecciones. El tratamiento es fácil de aplicar y de bajo costo y consiste en fraccionar la alimentación para evitar el ayuno prolongado. El pronóstico es excelente cuando el diagnóstico es presintomático, a través del análisis de una muestra de sangre en papel filtro, para el estudio de acilcarnitinas por espectrometría en tandem durante el período de RN e iniciando el fraccionamiento de la dieta inmediatamente.